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________LABORATORIO________
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Il metodo si basa sul principio della stratificazione a gradiente di densità delle cellule ematiche in capillari da ematocrito dopo centrifugazione, e sulla caratteristica di tutti i microrganismi non normalmente presenti nel sangue di concentrarsi nel buffy coat. L'evidenziazione dei microrganismi è resa possibile dall'arancio di acridina contenuto nel capillare che li colora in modo caratteristico ed inequivocabile durante l'osservazione del capillare al microscopio a fluorescenza. QBC
(Quantitative Buffy Coat)
Procedimento
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Per inversione mescolare molto bene il sangue.
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Riempire il capillare, dall'estremità più vicina ai due trattini blu.
Riempirlo per capillarità sino a un livello compreso tra i due trattini blu.
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Con un panno inumidito con candeggina pulire la superficie esterna del capillare dalle tracce di sangue.
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Inclinare il capillare per consentire al sangue di affluire all'estremità opposta, rivestita di arancio di acridina.
Far ruotare il capillare tra le dita varie volte per mescolare il sangue con il colorante.
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Dopo aver fatto retrocedere il sangue di alcuni mm chiudere con il dito indice l'estremità del capillare più vicina ai trattini bianchi.
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Inserire il tappo all'altra estremità.
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Con una pinza pulita, prelevare un galleggiante e inserirlo nell'estremità libera del capillare. Assicurarsi che il galleggiante sia stato completamente inserito.
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Sistemare il capillare nella scalanatura del rotore della centrifuga. Bilanciare il rotore.
Centrifugare 5'.
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Dopo aver tolto il capillare dalla centrifuga conservarlo in posizione verticale.
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Inserire il capillare nella scalanatura del ParaViewer in modo che l'estremità tappata fuoriesca dalla cavità del porta capillare.
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| | | | | Lettura
 Posizionare il ParaViewer con il capillare sul piatto del microscopio.
Aggiungere una goccia d'olio per immersione nella zona del buffy coat del capillare, mettere a fuoco con obiettivo 50x-60x-100x.
Nella zona dello strato eritrocitario espanso esaminare l'intera circonferenza del capillare facendolo ruotare nella scalanatura del ParaViewer. |
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